کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) فرآیند جداسازی اجزای یک مایع مایع است. یک نمونه مایع به یک جریان حلال (فاز متحرک) تزریق می شود که از طریق یک ستون بسته بندی شده با یک محیط جداسازی (فاز ثابت) جریان می شود. اجزاء در حین عبور از ستون با فرآیند مهاجرت تفاضلی از نمونه جدا می شوند.

جایی که نوارها از ستون بیرون می آیند، جریان آنها را به یک یا پاسخ چندساز می برد که یک ولتاژ را به عنوان تابعی از زمان ارائه می دهد. به این کروماتوگرام می گویند. برای هر پیک، زمانی که در آن پدیدار می شود، جزء نمونه را با توجه به یک استاندارد مشخص می کند. مساحت قله نشان دهنده کمیت است.

اجزای اصلی سیستم HPLC

  • گاز زدا حلال– گازهای هوا را از حلال ها در جریان حین به پمپ HPLC حذف می کند
  • پمپ HPLC– جریان حلال و تناسب را می کند
  • نمونه گیری خودکار (اتوسمپلر)– نمونه هایی را از ویال ها می گیرد و به جریان حلال ارائه شده توسط پمپ تزریق می کند.
  • سازساز(دتکتور)– به آنالیت های جدا شده از ستون HPLC پاسخ می دهد و یک خروجی خروجی برای نرم افزار تولید می کند.
  • آون ستون– ستون HPLC را در خود جای داده و دمایی را برای جداسازی های تکرار حفظ می کند

حالت های آبی ایزوکراتیک در مقابل مدرجیان

شرکتی ایزوکراتیک

  • یک ترکیب از حلال ها برای مدت زمان جداسازی استفاده می شود
  • پیک های احتمالی دیرتر به دلیل پراکندگی وسیع تر از پیک های مکان های اولیه هستند
  • باید بگذرد برای دوره‌ای از ستون‌ها با قدرت حلال بالاتر از آن می‌توان از مواد غیرقابل تحملی استفاده کرد که در اثر تزریق نمونه ایجاد می‌شود پاکسازی کند.

سیستمی دبیریان

  • ترکیب حلال ها به پیوسته یا گام به گام تغییر می کند
  • به طور کلی، قله ها در سراسر کروماتوگرام در مقایسه با ایزوکراتیک تیزتر هستند
  • برخی از جداسازی ها ممکن است به دست آید که با ایجاد ایزوکراتیک امکان پذیر نیست
  • زمان اجرای کروماتوگرام ممکن است در مقایسه با مکان ایزوکراتیک کوتاهتر باشد

حالت های پمپاژ شناور ایزوکراتیک و بهبودیان

پمپ ایزوکراتیک

پمپ تک کانالی که کاربر را ملزم می کند فاز متحرک را قبل از مخلوط کند. ترکیب با گذشت زمان ثابت می ماند.

پمپ پمپیان کم فشار کواترنر

یک پمپ 4 کانالی که مخلوطی از کانال های حلال افراد را تحت کنترل نرم افزار ایجاد می کند. مخلوط کردن از سر پمپ انجام می شود. ترکیب ممکن است با گذشت زمان تغییر کند.

پمپ گرادیان فشار بالا باینری

یک پمپ 2 کانالی که مخلوطی از 2 حلال را تحت کنترل نرم افزار ایجاد می کند. اختلاط پس از سر پمپ انجام می شود. ترکیب ممکن است با گذشت زمان تغییر کند.

ستون LC توصیه شده:

ستون شیمی: به عنوان مثال C18، C8، C4، فنیل-هگزیل، فرمت ستون بی فنیل: 100 x 3 میلی متر، ذرات 2.7 تا 5 میکرومتر

برنامه پمپ Shimadzu LabSolutions – بهبودیان غربالگری
برنامه پمپ Shimadzu LabSolutions – بهبودیان غربالگری

شهریان غربالگری – قدرتمند برای روش توسعه

تفسیر: برای ستون LC فاز معکوس که در آن آب است و ب علی است، این اولین اجزای نمونه را نشان می دهد که همه قطبی هستند. بنابراین، جداسازی ضعیف است زیرا مواد در فاز ثابت تقسیم کمی را تجربه می کنند. به عبارت دیگر، شرایط حل ضعیف و در شروع، ترکیبات نمونه را خیلی زود از بین میبرد.

برای اینکه مواد بیشتر به فاز ساکن تقسیم شوند، شیبیان را کاهش می دهد تا استحکام فاز متحرک به سرعت افزایش پیدا کند. مواد برای مدت طولانی باقی می مانند و شروع به جدا شدن از چند می کنند. توجه داشته باشید که ما یک ستون قوی را با حلال در پایان اجرا می‌شوییم تا به طور خودکار ستون را تمیز کنیم.

ما شیب را دوباره کاهش می دهد تا زمانی که شروع به دیدن یک جداسازی خوب در بازه زمانی کنیم.

محصولات سازهای UV/Vi

  • به آنالیت های کروموفوریک در محدوده 190 تا 800 نانومتر پاسخ می دهد
  • مانیتورینگ تک طول موج
  • برای اکثر آنالیت های آلی خوب است
  • سیستمی سازگاریان است

کارخانهسازهای فتودی آرایه (PDA)

  • به آنالیت های کروموفوریک در محدوده 190 تا 800 نانومتر پاسخ می دهد
  • مانیتورینگ چند طول موجی
  • پروفایل کامل پیک های کروماتوگرافی
  • برای اکثر آنالیت های آلی خوب است
  • سیستمی سازگاریان است

سازهای فلورسانس (FLD)

  • فقط به آنالیت هایی پاسخ می دهد که به طور طبیعی فلورسانس می کنند یا می توان آنها را از طریق مشتق سازی فلورسانس کرد.
  • فوق العاده حساس
  • سیستمی سازگاریان است

سازهای ضریب شکستRID

  • یکساز جهانی برای همه آنالیت ها در نظر گرفته شده است
  • نسبتاً غیر حساس
  • با شرایط سازگاریان سازگار نیست

نورسازهای پراکندگی تبخیری

  • یک سازنده تقریباً جهانی در نظر گرفته می شود که به آنالیت های کروموفوریک و غیرکروموفوریک پاسخ می دهد.
  • دانش خوب
  • سیستمی سازگاریان است

مجموعه سازهای مختلف سنجی جرمی(MS)

  • متمایزترین سازنده
  • اطلاعات انبوه را برای شناسه آنالیت و توضیح ساختار ارائه می دهد
  • بسیار حساس
  • سیستمی سازگاریان است

ستون های HPLC با ذرات سیلیس متخلخل بسته بندی شده اند.

ملاحظات هنگام انتخاب ستون

تصمیم “بهترین” فاز ثابت برای جداسازی بر اساس حلالیت نمونه و تفاوت های شیمیایی بین اجزای نمونه باشد.

  • محلول در حلال های آلی یا آبی؟
  • آشنایی با گروه های عملکردی سازنده؟ -اوه -COOH -CONH2; -C6H6 و غیره

تصمیم گیری در مورد ستون ها باید بر اساس مفاهیم ساختاری باشد.

  • تفکیک یک جفت مهم از مؤلفه ها؟ – تخت ستونی بلندتر
  • تحلیل و تحلیل سریع؟ – تخت ستون کوتاه تر
  • عالی برای همه؟ – ذرات کوچکتر
  • مصرف حلال را به حداقل برسانید؟ – قطر داخلی باریکتر

شیمی فازهای پیوندی

بسته بندی فاز پیوندی با سطح سیلیسی خالی شروع می شود

از طریق واکنش شیمیایی، ارتباط فاز پیوند اولیه حاصل می شود.

تولیدکنندگان به میزان پوشش فاز پیوندی بر حسب درصد بار کربن اشاره می کنند.

بیشتر سیلیس بدون واکنش باقی می ماند – برخی از گروه های سیلانول سطحی هنوز در معرض قرار دارند.

بخش، یک مرحله پیوند ثانویه، مولکول‌های کوچکتر «درپوش انتهایی» را بین رشته‌های فاز باند اولیه وارد می‌کند. این درپوش های انتهایی ممکن است قطبی یا غیر قطبی باشند.

ستون‌های مختلف از یک نوع فاز پیوندی از نظر قرار گرفتن در معرض سیلانول و پوشش انتهایی متفاوت خواهند بود، که قرار گرفتن از قطب‌های مختلف و ایجاد جداسازی متفاوت می‌شود.

C18
C18
C8
C8

شیمی فاز پیوندی مشترک

فنیل
فنیل
بی فنیل
بی فنیل
آلکیل آمید
آلکیل آمید
سیانو پروپیل
سیانو پروپیل
پنتافلوروفنیل پروپیل
پنتافلوروفنیل پروپیل
آمینو پروپیل
آمینو پروپیل

انتخاب های ستون شیمی بر اساس حلالیت نمونه

پدیده احتباس آبگریز

ستون‌های فاز معکوس دارای فاز پیوندی روی سطح ذرات سیلیس هستند که ماهیت آبگریز دارد. به عنوان مثال می توان به C30، C18، C8، C4 اشاره کرد.

در اصل، «مانند، مانند را تجزیه می کند». چنین ستونی دارای اجزای مختلف است که نمونه هایی از آبگریز هستند، تا زمانی که فاز متحرک در جذب آن برای آن جزء نمونه قوی تر نباشد. اجزای نمونه قطبی بیشتر دارند سریعتر از ستون خارج می شوند زیرا به میزان کمتری حفظ می شوند.

برای یک ستون فاز معکوس، از ترکیبی از حلال‌ها استفاده کنید که قطبیت کلی «بزرگ‌تر» (کمتر آبگریز) را نسبت به فاز ساکن ایجاد می‌کنند. به این ترتیب، اجزای نمونه دلیلی برای جذب به فاز ساکن (فاز بند ستونی) و مقاومت در برابر جریان با فاز متحرک (حلال) دارند.

از “ضعیف ترین” یا قطبی ترین شرط لازم برای تمایز بین اجزای نمونه در حین عبور از ستون استفاده کنید.

نمونه هایی از جفت حلال های رایج فاز متحرک عبارتند از: استونیتریل/آب و متانول/آب. تغییر نسبت علی/آب قطبیت کلی آن را تغییر می دهد.

نمونه ای از احتباس آبگریز

مولکول های زیر به راحتی روی ستون C8 فاز معکوس با استفاده از 50/50 استونیتریل/آب جدا می شوند. آلانین قطبی ابتدا از ستون و سپس ترفنیل غیر قطبی شسته می شود.

1,1′:3′,1”-ترفنیل آبگریز یا غیر قطبی
1,1′:3′,1”-ترفنیل آبگریز یا غیر قطبی
آلانین هیدروفیل یا قطبی
آلانین هیدروفیل یا قطبی

ارتباط با ما

آدرس : تهران – میرداماد – خیابان کازرون شمالی – کوچه نیک رای – پلاک 3 – طبقه 6 – واحد 13

شماره تماس : 02175311 – 02122919474 – 02122919720

شماره واتساپ : 09199060602

ایمیل: [email protected]

وب سایت : https://partogene.com

دستگاه HPLC, اتومپلر دستگاه HPLC, پمپ HPLC, دتکتور, دتکتور uv/vis, دتکتور برای HPLC, دتکتور ضریب شکست(RID), دتکتور اندازه گیری جرمی(MS), دتکتور فتودیود آرایه (PDA), دتکتور فلورسانس (FLD), دتکتور فلورسانس یا FLD, ستون های HPLC, کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا, گاز زدا حلال

اگر دوست داشتی امتیاز دادن یادت نره!